RNaseコンタミネーションのケースを解決する

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RNaseのコンタミネーションは、RNA分析ラボで混乱を引き起こす可能性があります。これらの問題とは何ですか?どのように解決できますか?

RNase:いつもの容疑者

RNaseは、生体内のRNA分解に関与する酵素です。それらはRNA分子の成熟に重要な役割を果たし、RNAを含むウイルスに対する防御の第一線であり、古いRNAの分解にも役立ちます。 RNaseにはさまざまな種類があり、ラボで使用される主な種類は、一本鎖RNAを特異的に標的とするRNaseAです。

RNase Aは、一般的にラボでの使用で最も丈夫な酵素の1つとして説明されています。 RNaseは一般にジスルフィド結合が非常に豊富であるため、非常に安定した酵素となり、オートクレーブ処理にも耐えることができます。

RNaseは多くの生物学的プロセスに必要な要素ですが、RNA分析に携わる人々にとっては苦痛であり障害であると最もよく説明されています。

RNAシーケンシングラボをRNaseで汚染することは非常に簡単ですが、完全な根絶を確実にすることは悪名高いほど困難です。これは、空気中の微生物源、および人間の皮膚、髪の毛、唾液に環境RNaseが存在するためです。

汚染:犯罪

RNA実験を成功させるためには、RNA分子が可能な限り無傷でなければならないことは明らかであるように思われます。ただし、RNA分子が存在するとすぐに分解するRNaseの干渉により、これは当てはまらないことがよくあります。その後、研究者は彼らに異常を投げかけ、一貫性のない結果をもたらす可能性があり、それは欲求不満と混乱を引き起こします。

「RNaseは広く行き渡っており、重要な表面を汚染すると、RNAの配列決定と分析に従事する研究所に問題を引き起こす可能性があります。 RNaseなどのごく少量の一般的な酵素は、実験シリーズを不正確にする可能性があります。実験装置を除染するための標準的な技術には数時間かかる場合があります」と、Phoseon Technology(OR、USA)のアプリケーション科学者であるテレサトンプソンはコメントしました。

RNaseコンタミネーション

「通常の」ラボでRNaseの物理的な存在を防ぐことは、非現実的な期待です。代わりに、状況を徹底的に管理することは、より現実的な願望です。研究者は、新しい使い捨て製品を頻繁に開き、新しい手袋を使用することで、RNaseの汚染を最小限に抑えることができます。これまで注意深いRNAアナリストにはあまりにも馴染みのある状況に思えるかもしれません。しかし、これに加えて、さまざまな方法でRNase分子を不活性化し、それらの活性を停止させ、RNAに対して役に立たなくすることが可能です。

RNase不活化のこれらの現在の方法は、費用がかかり、時間がかかり、無駄になる傾向があります。それらには、水とオートクレーブのDEPC処理、表面の化学的除染、機器の化学的処理、その後のRNaseフリー水でのすすぎとガラス器具のベーキングが含まれます。

ラボがいつ十分にきれいであるかを知ることは困難です。ピペットを机の上に置いて、脱落した皮膚細胞からRNaseを拾うか、オートクレーブ処理した機器を使い始めて、すぐに空気から新しいRNase分子を推測し始めるだけです。オートクレーブは、室温まで冷却しても部分的な活性を保持できるため、それ自体ですべてのRNase活性を破壊するわけではありません。

化学洗浄は酵素を不活性化する可能性がありますが、他の方法で実験を汚染する可能性のある化学残留物を残します。

有望な結果を示し、迅速で化学薬品を使用しないRNase除染の新しい方法があります。紫外線はRNaseを不可逆的に不活性化する可能性があり、これが1分未満で可能であることを示す研究があります。

光があれ!

Phoseon Technologyは、RNase除染のためのUV光の使用を新しい技術に発展させました。

「KeyPro™テクノロジーは、高強度のUVLEDマイクロプレート除染システムです。ダイオードのアレイは、2つの波長(275nmと365nm)の高強度UV光を放出し、RNaseを迅速かつ確実に不活性化することが証明されています。アレイが除染チャンバー全体をスキャンすると、光はスライドまたはプレートの上部に露出しているすべての領域に到達します」とトンプソン氏は説明します。

「RNaseAを含む実験室の汚染物質の完全な不活化は、KeyProシステムによって5分未満で、従来の方法の数分の1のコストで達成できます。」

KeyProテクノロジーは現在、マイクロプレート、準備スライド、および小さな表面の除染を対象としており、高さ調節可能なプラットフォームと組み合わせたUVLEDのスキャンアレイによって機能します。

KeyProシステム

紫外線を使用することで、現在の除染方法に関連する問題の多くが解消されます。その後、RNaseフリーの水で機器を繰り返しすすぐ必要はなく、化学物質の残留物がないため、他のルートでの時間と潜在的な汚染が削減されます。また、使い捨ての必要性が少なくなり、コストと無駄が削減されます。

研究によると、プラスチックを含むすべての一般的な実験室の表面は、このUV光の使用によって安全に除染できることが示されています。

これから恩恵を受けることができるプロトコルには、複数のタイプのRNAシーケンス、リボソームプロファイリング、およびRNAの次世代シーケンスが含まれることが示されています。

トンプソンが結論付けたように、この技術がさらに開発されて、より大きな機器の除染と光の波長の操作が可能になることが期待されています。

「より大きなチャンバーを備えたモデルは、どの機器を除染できるかについてより柔軟性を持たせるために計画されています。さらに、酵素活性を加速したり、タンパク質の分子構造の特定の部分のみを選択的に変性させたりするなど、他の波長の光を使用して生体分子の機能を操作できることを発見しました。」

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