RNase 오염 사례 해결

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RNase 오염은 RNA 분석 실험실에서 혼란을 일으킬 수 있습니다. 이러한 문제는 무엇이며 어떻게 해결할 수 있습니까?

RNase : 일반적인 용의자

RNase는 살아있는 유기체에서 RNA 분해를 담당하는 효소입니다. 이들은 RNA 분자의 성숙에 중요한 역할을하며, RNA 함유 바이러스에 대한 첫 번째 방어선이자 오래된 RNA의 분해에 있습니다. RNase에는 여러 가지 유형이 있으며 실험실에서 사용되는 주요 유형은 특히 단일 가닥 RNA를 표적으로하는 RNase A입니다.

RNase A는 일반적으로 실험실에서 가장 강력한 효소 중 하나로 설명됩니다. RNase는 일반적으로 이황화 결합이 매우 풍부하여 믿을 수 없을 정도로 안정적인 효소가되고 오토 클레이브에서도 살아남을 수 있습니다.

RNase는 많은 생물학적 과정의 필수 구성 요소이지만 RNA 분석에 종사하는 사람들에게 고통과 장애로 가장 잘 설명됩니다.

RNA 염기 서열 분석 실험실을 RNase로 오염시키는 것은 믿을 수 없을 정도로 쉽지만 완전한 박멸을 보장하기는 매우 어렵습니다. 이는 사람의 피부, 머리카락 또는 타액뿐만 아니라 공기 중의 미생물 공급원에 환경 RNase가 존재하기 때문입니다.

오염 : 범죄

RNA 실험이 성공하기 위해서는 RNA 분자가 가능한 한 온전해야한다는 것이 분명해 보입니다. 그러나 존재하는 경우 RNA 분자를 빠르게 분해하는 RNase의 간섭으로 인해 그렇지 않은 경우가 많습니다. 그런 다음 연구원은 비정상적인 결과가 발생하고 결과가 일치하지 않아 좌절감과 혼란을 초래할 수 있습니다.

“RNase는 널리 퍼져 있으며 중요한 표면을 오염 시키면 RNA 시퀀싱 및 분석에 관여하는 실험실에 문제가 될 수 있습니다. RNase와 같은 소량의 일반적인 효소는 실험 시리즈를 부정확하게 만들 수 있습니다. 실험실 장비의 오염 제거를위한 표준 기술은 몇 시간이 걸릴 수 있습니다.”라고 Phoseon Technology (OR, USA)의 응용 과학자 인 Theresa Thompson이 말했습니다.

RNase 오염

'정상적인'실험실에서 RNase의 물리적 존재를 방지하는 것은 비현실적인 기대입니다. 대신 상황을 철저히 관리하는 것이보다 현실적인 열망입니다. 연구원은 새 일회용품을 자주 개봉하고 새 장갑을 사용하여 RNase 오염을 최소화 할 수 있습니다. 세심한 RNA 분석가에게는 너무나 친숙한 상황입니다. 그러나이 외에도 다양한 방법으로 RNase 분자를 비활성화하여 활성을 중단하고 RNA에 대해 쓸모 없게 만드는 것이 가능합니다.

이러한 현재의 RNase 불 활성화 방법은 비용이 많이 들고 시간과 낭비가 많은 경향이 있습니다. 여기에는 물 및 오토 클레이브의 DEPC 처리, 표면의 화학적 오염 제거 및 장비의 화학적 처리 후 RNase가없는 물로 헹구고 유리 제품을 베이킹하는 것이 포함됩니다.

실험실이 언제 충분히 깨끗한 지 알기는 어렵습니다. 필요한 것은 피펫을 책상 위에 놓고 흘린 피부 세포에서 RNase를 집어 올리거나 공기에서 새로운 RNase 분자를 즉시 추론하기 위해 오토 클레이브 장비를 사용하기 시작하는 것입니다. 오토 클레이브는 또한 상온으로 냉각 할 때 부분적인 활동을 유지할 수 있기 때문에 모든 RNase 활동을 자체적으로 파괴하지 않습니다.

화학적 세척은 효소를 비활성화 할 수 있지만 다른 방식으로 실험을 잠재적으로 오염시킬 수있는 화학적 잔류 물을 남깁니다.

유망한 결과를 보여주고 빠르고 화학 물질이없는 새로운 RNase 오염 제거 방법이 있습니다. UV 광선은 RNase를 비가 역적으로 비활성화 할 수 있으며 연구 결과에 따르면 1 분 이내에 가능합니다.

빛이 있으라!

Phoseon Technology는 RNase 오염 제거를위한 UV 광선을 새로운 기술로 개발했습니다.

“KeyPro ™ 기술은 고강도 UV LED 마이크로 플레이트 오염 제거 시스템입니다. 다이오드 어레이는 RNase를 빠르고 안정적으로 비활성화하는 것으로 입증 된 275nm 및 365nm의 두 가지 파장으로 고강도 UV 광선을 방출합니다. 어레이가 오염 제거 챔버를 스캔 할 때 빛은 슬라이드 또는 플레이트의 모든 상단 노출 영역에 도달합니다.”라고 Thompson이 설명했습니다.

"RNase A를 포함한 실험실 오염 물질의 완전한 비활성화는 KeyPro 시스템으로 기존 방법보다 훨씬 적은 비용으로 5 분 이내에 완료 할 수 있습니다."

KeyPro 기술은 현재 마이크로 플레이트, 준비 슬라이드 및 작은 표면 오염 제거를 대상으로하며 높이 조절 플랫폼과 결합 된 UV LED의 스캐닝 어레이에 의해 작동합니다.

KeyPro 시스템

UV 광선을 사용하면 현재 오염 제거 방법과 관련된 많은 문제를 해결할 수 있습니다. 나중에 RNase가없는 물로 장비를 반복적으로 헹굴 필요가 없으며 화학 잔류 물이 없으므로 다른 경로를 통한 시간과 잠재적 오염을 줄일 수 있습니다. 또한 일회용품에 대한 필요성이 줄어들어 비용과 낭비가 줄어 듭니다.

연구에 따르면 플라스틱을 포함한 모든 일반적인 실험실 표면은 이러한 자외선 사용을 통해 안전하게 오염을 제거 할 수 있습니다.

이를 통해 이점을 얻을 수있는 프로토콜에는 여러 유형의 RNA 시퀀싱, 리보솜 프로파일 링 및 RNA의 차세대 시퀀싱이 포함되는 것으로 나타났습니다.

Thompson이 결론을 내린 것처럼이 기술이 더 큰 장비의 오염 제거와 광파장 조작을 가능하게하기 위해 더 개발 될 수 있기를 바랍니다.

“더 큰 챔버가있는 모델은 오염을 제거 할 수있는 장비의 유연성을 높이기 위해 계획됩니다. 그 외에도 효소 활동을 가속화하거나 단백질 분자 구조의 특정 부분 만 선택적으로 변성시키는 것과 같이 생체 분자 기능을 조작하는 데 다른 파장의 빛을 사용할 수 있다는 사실을 발견했습니다.”

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