RNase: comparando-te à neve em um dia de inverno

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A reprodutibilidade, a sustentabilidade e os recursos estão todos atualmente no topo da agenda e são mais importantes do que nunca para os cientistas de laboratório. Poderia haver agora algumas soluções para estas preocupações para aqueles que trabalham com o RNA?

Usando numerosos conjuntos de placas de 96 poços colocados em vários locais e deixados no decorrer de um dia, a equipe observou que alguns poços estariam completamente livres de contaminação RNase, e alguns estariam completamente contaminados. Eles concluíram que era completamente esporádico, sem nenhuma dependência.

"Esperávamos que fosse como o acúmulo de neve em um dia de inverno - constante e constante". Mas, ao invés disso, pode ser repentino, inesperado e catastrófico. Não é fácil de definir. Você pode não ter contaminação durante uma hora deixando o equipamento de fora, ou ele pode ser contaminado no momento em que você abre uma embalagem esterilizada", explicou Theresa Thompson, uma cientista de aplicação da Phoseon Technology.

Portanto, pode-se concluir facilmente como a contaminação RNase levaria a um aumento do desperdício, perda de tempo e problemas de reprodutibilidade. Todos esses três problemas são questões incrivelmente oportunas quando a sociedade, a política e a sustentabilidade são consideradas.

Trabalhando com amortecedores Tris

Em qualquer caminho de pesquisa de RNA; se houver qualquer degradação da amostra, os resultados podem ser inconsistentes, imprecisos e difíceis de serem obtidos. Embora o RNase seja incrivelmente resistente à inativação, as rotas usuais de descontaminação do RNase incluem tratamento com DEPC durante a noite e autoclavagem, o que é incrivelmente demorado.

Muitas experiências são realizadas em amortecedores Tris. Estes amortecedores não podem ser submetidos aos mesmos métodos de descontaminação, pois o DEPC ataca os grupos de aminoácidos do Tris, limitando sua capacidade de amortecimento e destruindo-se no processo, deixando-o incapaz de inativar qualquer RNase contaminante.

A Phoseon Technology descobriu que um comprimento de onda UV de 280 nm pode atingir o RNase A, deixando-o irreversivelmente inativado, sem desvio do pH ou da capacidade de amortecimento dos amortecedores Tris. Desde então, a Phoseon incorporou isto em sua própria plataforma tecnológica inovadora, KeyPro™, formada por luzes de alta intensidade baseadas em LED que podem atingir intensidades que não foram alcançadas com outras fontes de luz.

A KeyPro KP100

Imediatamente antes de executar qualquer experiência, a plataforma é ligada, e em menos de 5 minutos, todos os equipamentos, incluindo os amortecedores Tris, são completamente descontaminados do RNase. As formas pelas quais esta plataforma pode beneficiar os pesquisadores, podem ser atraídas para um quadro muito maior das questões-chave para os cientistas no momento atual.

Reprodutibilidade

A crise de reprodutibilidade é uma crise atual e contínua nas ciências da vida, na qual muitos métodos experimentais não podem ser reproduzidos. A reprodutibilidade dos experimentos é uma parte essencial do método científico, pois as pesquisas e hipóteses de sucesso se baseiam no pressuposto justo, mas falso, de que essas pesquisas não reprodutíveis podem ser reproduzidas.

Como sabemos agora, a contaminação RNase é aleatória. Enquanto alguns poços em uma placa de 96 poços podem estar completamente livres de RNase, alguns também podem estar completamente contaminados.

"A plataforma é diferente de uma autoclave - é um sistema de iluminação de estado sólido, com calibração para garantir que a mesma quantidade de luz esteja sempre sendo entregue. Mesmo quando os próprios diodos envelhecem e um diodo individual tem menos potência; o sistema compensa isso toda vez que é executado. O mesmo protocolo que você executa hoje lhe dará a mesma saída daqui a 5 anos", comentou Jay Pasquantonio, Gerente de Produto Sênior da Phoseon Technology.

A luz garante a mesma descontaminação em todos os 96 poços da placa, portanto não há necessidade de se preocupar com resultados variáveis com base na presença do RNase em determinados poços. A desconfiança pública nos cientistas está no auge, com a crise de reprodutibilidade invalidando teorias e notícias falsas. Portanto, qualquer garantia de reprodutibilidade trará conforto.

Recursos

O financiamento da pesquisa científica é atualmente motivo de preocupação para muitas escolas, faculdades e universidades. Ambientes políticos instáveis levaram a cortes de custos e a um planejamento mais cuidadoso dos fundos. A compra de amortecedores Tris sem RNase-sem custo, além de ser potencialmente esbanjadora e insustentável.

O tempo como recurso também está se tornando cada vez mais tenso. Com as pessoas trabalhando mais horas para alcançar resultados, o tempo é realmente essencial. KeyPro leva menos de 5 minutos para descontaminar os amortecedores Tris do RNase e prepará-los para o uso. O experimento pode ser executado imediatamente depois. Isto economiza muito tempo em comparação com os métodos tradicionais de descontaminação.

Uma demonstração do tempo que pode ser economizado usando KeyPro em comparação com os métodos tradicionais de contaminação.

Além disso, uma vez ocorrida a contaminação RNase, que pode ser tão logo haja exposição ao ar, o experimento terá que ser desconsiderado e o processo de descontaminação terá que ser completado novamente, o que significa que os pesquisadores poderão perder períodos de tempo enormes desnecessariamente.

Sustentabilidade

O uso do sistema KeyPro não só tem o potencial de limitar os resíduos plásticos de uso único, como também pode limitar os volumes de reativos, tampão e resíduos de produtos, que também podem ser bastante caros. Se os tampões são descontaminados imediatamente antes do uso, pequenos volumes são tomados e usados imediatamente, portanto os níveis de resíduos podem ser mantidos baixos, pois não há necessidade de descartar quaisquer soluções potencialmente contaminadas e não há excesso desnecessário.

Para concluir, a KeyPro conquista questões próximas aos corações e mentes dos cientistas da vida, que se combinam para facilitar um pouco a vida. Seja economizando tempo na descontaminação que pode ser melhor gasto com a família ou amigos, economizando dinheiro que pode ser melhor gasto em outros recursos-chave, ou limitando a quantidade de resíduos produzidos pela pesquisa de um indivíduo, e contribuindo para garantir um futuro mais sustentável.

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