解决RNase污染的情况

生物技术实验室图片

RNase污染会在RNA分析实验室造成混乱。这些问题是什么?如何解决?

RNase:通常的嫌疑犯

RNase是负责生物体中RNA降解的酶。它们在RNA分子的成熟中起关键作用,并且是抵御含RNA的病毒以及旧RNA分解的第一道防线。 RNase有许多不同的类型,实验室中使用的主要类型是RNase A,它专门针对单链RNA。

RNase A通常被描述为实验室使用中最强的酶之一。核糖核酸酶通常非常富含二硫键,这使它们成为非常稳定的酶,甚至可以在高压灭菌后存活。

虽然RNase是许多生物学过程的必要组成部分,但最好将其描述为RNA分析工作的痛苦和障碍。

用RNase污染RNA测序实验室非常容易,但是很难确保完全消除。这是由于空气中以及人类皮肤,头发或唾液中微生物来源中存在环境RNase。

污染:犯罪

为了使RNA实验成功,显然RNA分子必须尽可能完整。但是,由于存在时会迅速分解RNA分子的RNase的干扰,通常情况并非如此。然后,研究人员可能会感到异常,结果不一致,从而导致沮丧和困惑。

核糖核酸酶无处不在,当污染关键表面时,可能会给从事RNA测序和分析的实验室带来问题。少量的常见酶(例如RNase)会使实验系列不准确。 Phoseon Technology(美国俄勒冈州)的应用科学家Theresa Thompson评论说,对实验室设备进行消毒的标准技术可能要花费数小时。

RNase污染

在“正常”实验室中阻止RNase的物理存在是不切实际的期望。相反,彻底管理局势是更现实的愿望。研究人员可以通过经常打开新鲜的一次性用品并使用新的手套,将RNase污染降至最低。对于仔细的RNA分析人员来说,这种情况似乎太熟悉了。然而,最重要的是,可以通过各种方法使RNase分子失活,从而终止其活性并使它们对RNA失去作用。

这些当前的RNase灭活方法往往是昂贵,费时和浪费的。其中包括水的DEPC处理和高压灭菌,表面的化学净化和设备的化学处理,然后用无RNase的水冲洗和烘烤玻璃器皿。

很难知道实验室何时足够干净。所要做的就是将移液器放在桌子上,以从脱落的皮肤细胞中提取RNase,或者开始使用高压灭菌的设备,仅是为了立即开始从空中推断出新的RNase分子。高压灭菌也不会自行破坏所有RNase活性,因为它们在冷却到室温时可以保留部分活性。

虽然化学清洁可能会使酶失活,但会留下化学残留物,这些化学残留物可能以其他方式污染实验。

有一种新兴的RNase净化方法,已显示出令人鼓舞的结果,并且快速且无化学物质。紫外线可以使RNase不可逆转地失活,研究表明,在不到1分钟的时间内可以做到这一点。

让它发光!

Phoseon Technology已将使用紫外线进行RNase净化的技术开发为一种新颖的技术:

“ KeyPro™技术是一种高强度UV LED微孔板去污系统。二极管阵列可以发出两种波长的高强度紫外光,分别为275 nm和365 nm,可以快速可靠地灭活RNase。当阵列扫过去污室时,光线到达载玻片或平板的所有顶部暴露区域。”汤普森解释说。

“ KeyPro系统可在5分钟内完全灭活包括RNase A在内的实验室污染物,而成本仅为传统方法的一小部分。”

KeyPro技术目前针对微孔板,制备载玻片和小的表面去污,并通过结合了可调高度平台的UV LED扫描阵列工作。

KeyPro系统

紫外线的使用消除了与当前净化方法相关的许多问题。之后,无需使用不含RNase的水重复冲洗设备,并且没有化学残留物,从而减少了时间并减少了其他途径的潜在污染。对一次性用品的需求也减少了,从而减少了成本和浪费。

研究还表明,通过使用紫外线,可以安全地对所有常见的实验室表面,包括塑料表面进行消毒。

已经证明,可以从中受益的方案包括多种类型的RNA测序,核糖体谱分析和下一代RNA测序。

汤普森总结说,希望可以进一步开发该技术,以实现对较大设备的净化以及对光波长的控制。

“计划使用具有较大腔室的模型,以便在可以净化哪些设备方面更加灵活。除此之外,我们发现其他波长的光可用于操纵生物分子的功能,例如加快酶的活性或仅使蛋白质分子结构的某些部分选择性变性。”

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